Plasmide CRISPR/Cas9 KO CNPase (h): sc-402463

Présentation

CNP code la 2’,3’-nucléotide cyclique 3’-phosphodiestérase (CNPase), une enzyme associée à la myéline, enrichie dans les oligodendrocytes, qui hydrolyse les nucléotides cycliques 2’,3’ et contribue à la formation et au maintien de la gaine de myéline. La CNPase se localise dans la myéline non compacte et dans des microdomaines cytosquelettiques/membranaires, où elle est liée au métabolisme de l’ARN, à l’extension des prolongements et à la régulation de la morphologie des oligodendrocytes. Par ces fonctions, la CNPase soutient les interactions axone–glie et la stabilité de la myéline, en s’inscrivant dans des voies qui régissent la différenciation gliale et les réponses neuro-inflammatoires. Une expression altérée de CNP ou une activité modifiée de la CNPase ont été associées à des contextes démyélinisants et neurodégénératifs, ce qui en fait une cible utile pour des études mécanistiques de la biologie de la substance blanche.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CNPase (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CNP dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CNP, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CNP à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CNPase.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CNP pour l'étude de la signalisation de CNPase, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CNP essentiels à la fonction de CNPase
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CNP pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le CNPase plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le CNPase plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CNP. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le CNPase plasmide HDR (h) et le CNPase (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CNP pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CNP définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.