Plasmide CRISPR d'Activation (h) CNPase: sc-402463-ACT

Le gène humain **CNP** code la **2′,3′-phosphodiestérase des nucléotides cycliques 3′** (CNPase), une enzyme abondante associée à la myéline, impliquée dans la maturation des oligodendrocytes, le maintien de la gaine de myéline et l’organisation du cytosquelette. La CNPase hydrolyse les nucléotides cycliques 2′,3′ et participe à des processus liés à l’ARN ainsi qu’à des interactions membrane–cytosquelette qui influencent l’extension des prolongements gliaux et le couplage axone–glie. Des altérations de l’expression ou de l’activité de CNP ont été associées à des phénotypes de démyélinisation et à des contextes neuro-inflammatoires, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de l’intégrité de la substance blanche et de la connectivité neuronale. En tant que marqueur enrichi dans les cellules gliales, la CNPase est fréquemment utilisée pour analyser les voies qui régissent la myélinisation, les réponses au stress des oligodendrocytes et les mécanismes à l’origine de l’instabilité de la myéline.

CNPase Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CNP sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CNPase Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CNP dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CNP, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CNPase. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CNP natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CNPase au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CNPase dans les cellules tumorales présentant une expression de CNP silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.