Plasmide CRISPR d'Activation (h) CNOT1: sc-403431-ACT

Le gène humain **CNOT1** code une protéine d’échafaudage centrale du complexe **CCR4–NOT**, un régulateur multisous-unités de l’expression génique qui couple le contrôle transcriptionnel à la désadénylation, au décapping et à la dégradation des ARNm. En coordonnant le recrutement et l’activité des désadénylases et en interagissant avec des protéines liant l’ARN ainsi qu’avec la machinerie effectrice des microARN, CNOT1 contribue à déterminer la stabilité des transcrits et l’efficacité de la traduction dans divers programmes cellulaires. Cette régulation est essentielle à la progression du cycle cellulaire, à la différenciation, aux réponses au stress et au maintien de la protéostasie via des effets étendus sur le renouvellement des ARNm. La dérégulation des composants de CCR4–NOT, dont CNOT1, a été associée à des altérations de l’homéostasie des ARN et des programmes transcriptionnels observées en cancérologie et dans des phénotypes neurodéveloppementaux, ce qui souligne sa pertinence pour les études mécanistiques des réseaux de régulation génique liés aux maladies.

CNOT1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CNOT1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CNOT1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CNOT1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CNOT1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CNOT1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CNOT1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CNOT1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CNOT1 dans les cellules tumorales présentant une expression de CNOT1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.