Plasmide CRISPR d'Activation (h) CNBP: sc-404090-ACT

La CNBP humaine (cellular nucleic acid-binding protein), également appelée zinc finger protein 9, est un facteur conservé se liant aux acides nucléiques simple brin, qui module la transcription et la traduction de cibles riches en GC. La CNBP participe au métabolisme de l’ARN et à la dynamique des complexes ribonucléoprotéiques, influençant des processus tels que la régulation de gènes en réponse au stress, la croissance cellulaire et la différenciation. Par ses interactions avec des acides nucléiques régulateurs et des éléments de promoteur, la CNBP peut façonner des programmes liés à la protéostase et à la signalisation du développement. Une activité CNBP dérégulée, ainsi que des mécanismes associés aux répétitions, ont été impliqués dans la biologie de maladies neuromusculaires et neurodéveloppementales, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude du contrôle de l’expression génique et des mécanismes pathogéniques.

CNBP Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CNBP sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CNBP Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CNBP dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CNBP, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CNBP. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CNBP natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CNBP au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CNBP dans les cellules tumorales présentant une expression de CNBP silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.