Plasmide Double Nickase (m) CMTM4: sc-430183-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) CMTM4 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide CMTM4 Double Nickase (m) et le plasmide CMTM4 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Cmtm4. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: CMTM4 Antibody (1E8): sc-81942
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) CMTM4 | sc-430183-NIC | 20 µg | $410.00 |
Cmtm4 code CMTM4, une protéine transmembranaire de la famille MARVEL de type CKLF, impliquée dans l’organisation membranaire et le trafic vésiculaire. CMTM4 participe à des processus de tri endosomal qui influencent la stabilité et la disponibilité en surface de protéines immunorégulatrices clés, dont PD‑L1, façonnant ainsi la signalisation intercellulaire et des voies liées à l’immunité. Dans les modèles murins, CMTM4 est étudiée dans le contexte de la biologie des cellules épithéliales et immunitaires, où des perturbations peuvent affecter la prolifération, la différenciation et les réponses inflammatoires. Une dérégulation du trafic et de la signalisation associés à CMTM4 a été reliée à des mécanismes pertinents pour l’immunologie des tumeurs et d’autres pathologies impliquant une altération du renouvellement des protéines membranaires.
CMTM4 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Cmtm4 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Cmtm4. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Cmtm4. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Cmtm4.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.