CLN1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-422390

Übersicht

Ppt1 kodiert die Palmitoyl-Protein-Thioesterase 1 (CLN1), ein lysosomales depalmitoylierendes Enzym, das thioestergebundene Fettsäurereste von S-palmitoylierten Proteinen entfernt und so deren Abbau und intrazellulären Transport erleichtert. Über die Regulation der lysosomalen Proteostase, des Recyclings von Membranproteinen und der Lipidverarbeitung trägt CLN1 zur neuronalen Homöostase bei und ist mit Autophagie‑Lysosom‑Signalwegen verknüpft. Ein Verlust der CLN1-Aktivität steht im Zusammenhang mit der Biologie der neuronalen Ceroid-Lipofuszinose, die durch eine beeinträchtigte lysosomale Degradation und die Anreicherung von Speichermaterial in postmitotischen Geweben gekennzeichnet ist. In Mausmodellen bietet eine Störung von Ppt1 ein gut handhabbares Modell, um zu untersuchen, wie eine gestörte Depalmitoylierung die synaptische Aufrechterhaltung, neuroinflammatorische Signalgebung und die lysosomenabhängige Qualitätskontrolle beeinflusst.

Das CLN1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Ppt1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Ppt1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Ppt1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die CLN1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Ppt1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der CLN1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Ppt1-Exone abzielen, die für die CLN1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Ppt1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom CLN1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom CLN1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Ppt1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das CLN1 HDR-Plasmid (m) und CLN1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Ppt1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Ppt1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.