CLK4 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419690

Descripción general

Clk4 codifica la quinasa 4 similar a CDC (CLK4), una quinasa de doble especificidad que fosforila factores de empalme ricos en serina/arginina (SR) y ayuda a coordinar el empalme del pre-ARNm con los programas transcripcionales. Al modular la actividad de las proteínas SR, CLK4 contribuye a decisiones de empalme alternativo que influyen en la progresión del ciclo celular, la diferenciación y la expresión génica en respuesta al estrés. La señalización de la familia CLK se cruza con redes de procesamiento de ARN que determinan la diversidad del proteoma, y la regulación alterada del empalme se vincula con frecuencia a la transformación oncogénica y a fenotipos del neurodesarrollo en modelos experimentales. En sistemas murinos, la perturbación de Clk4 ofrece una vía manejable para analizar cómo la dinámica de fosforilación asociada al espliceosoma afecta a isoformas de transcritos específicas de tejido y a los resultados de vías aguas abajo.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO CLK4 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Clk4 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Clk4 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Clk4 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína CLK4.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Clk4 para la investigación de la señalización de CLK4, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Clk4 críticos para la función de CLK4
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Clk4 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido CLK4 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido CLK4 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Clk4. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR CLK4 (m) y el plásmido HDR CLK4 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Clk4 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Clk4 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.