Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
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CLIP-170 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-425158
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CLIP-170 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico CLIP-170, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: CLIP-170 Antibody (F-3): sc-28325
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CLIP-170 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m) | sc-425158 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
Clip1 codifica CLIP-170, una proteina che si associa alle estremità in crescita (plus-end) dei microtubuli e collega le punte dinamiche dei microtubuli a siti corticali e organelli, coordinando il trasporto intracellulare e l’architettura cellulare. CLIP-170 partecipa alla regolazione della polimerizzazione dei microtubuli, all’aggancio tra cinetocoro e microtubuli durante la mitosi e al traffico di complessi vescicolari e proteici tramite interazioni con dineina/dinactina e altre reti di +TIP. Attraverso questi ruoli, Clip1 contribuisce a processi quali polarizzazione cellulare, migrazione e organizzazione del fuso, spesso alterati in contesti proliferativi e di neurosviluppo. Le alterazioni della dinamica dei microtubuli e della fedeltà della segregazione cromosomica associate a vie dipendenti da CLIP-170 sono rilevanti per lo studio di meccanismi legati all’instabilità genomica e alla disfunzione del citoscheletro in modelli di malattia.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CLIP-170 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Clip1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Clip1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Clip1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CLIP-170.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Clip1 per lo studio della segnalazione di CLIP-170, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni Clip1 critici per la funzione di CLIP-170
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Clip1 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal CLIP-170 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal CLIP-170 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Clip1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal CLIP-170 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR CLIP-170 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Clip1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Clip1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.