Plasmide CRISPR d'Activation (h) CLIP-170: sc-401279-ACT

Le gène humain **CLIP1** code **CLIP-170**, une protéine cytoplasmique associée à l’extrémité « plus » des microtubules, qui se fixe à leurs extrémités et les relie à des cargaisons cellulaires ainsi qu’à des sites corticaux. CLIP-170 coordonne la dynamique des microtubules, la capture des kinétochores et les interactions avec le complexe dynéine–dynactine et d’autres complexes de type +TIP, soutenant le transport intracellulaire, l’organisation du fuseau mitotique et la polarité cellulaire. Par ces fonctions, CLIP1 contribue à des processus tels que la progression mitotique et la migration dirigée, tandis que des altérations de la régulation des microtubules et des réseaux de trafic sont fréquemment impliquées dans le comportement des cellules tumorales et les dysfonctionnements du neurodéveloppement. CLIP-170 est donc largement étudiée dans les voies qui gouvernent le remodelage du cytosquelette, la ségrégation des chromosomes et le positionnement des organites.

CLIP-170 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CLIP1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CLIP-170 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CLIP1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CLIP1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CLIP-170. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CLIP1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CLIP-170 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CLIP-170 dans les cellules tumorales présentant une expression de CLIP1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.