Plasmide Double Nickase (m) CLIM-2: sc-421402-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) CLIM-2 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide CLIM-2 Double Nickase (m) et le plasmide CLIM-2 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Ldb1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: CLIM-2 Antibody (C-9): sc-365074
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) CLIM-2 | sc-421402-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (m2) CLIM-2 | sc-421402-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
La protéine 1 liant les domaines LIM (Ldb1), également appelée CLIM-2, est un adaptateur nucléaire qui relie les facteurs de transcription LIM-homeodomain et LIM-only afin d’assembler des complexes régulateurs de plus haut niveau. Dans les cellules de souris, Ldb1 contribue à coordonner des programmes transcriptionnels spécifiques de lignée qui façonnent la mise en place des patrons embryonnaires, la différenciation hématopoïétique et le développement neuronal, en stabilisant la communication entre enhancers et promoteurs. Par ses interactions avec des facteurs tels que les protéines LHX et les cofacteurs LMO, elle module le contrôle de l’expression génique associé à la chromatine ainsi que les décisions de destin cellulaire. La dérégulation des réseaux transcriptionnels centrés sur Ldb1 est pertinente pour comprendre les mécanismes de différenciation aberrante et les circuits transcriptionnels oncogéniques, ce qui en fait une cible utile pour disséquer des voies régulatrices impliquées dans le développement et les maladies.
CLIM-2 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Ldb1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Ldb1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Ldb1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Ldb1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.