Plasmide Double Nickase (h) CLIC1: sc-402391-NIC

CLIC1 code pour le canal intracellulaire au chlorure 1, une protéine métamorphique pouvant exister sous forme soluble dans le cytosol ou s’associer aux membranes cellulaires afin d’influencer la conductance au chlorure, l’équilibre rédox et la régulation du pH intracellulaire. Il a été impliqué dans la régulation du volume cellulaire, la dynamique du cytosquelette et le trafic vésiculaire, et est fréquemment étudié dans le contexte des réponses au stress oxydatif et de la signalisation inflammatoire. Il a été rapporté que l’activité et l’expression de CLIC1 varient lors de l’activation des cellules immunitaires et de la transformation cellulaire, ce qui soutient l’étude de sa contribution aux programmes de prolifération, de migration et de survie. Une dérégulation de CLIC1 a été associée à plusieurs contextes pathologiques, notamment en cancérologie et dans la neuroinflammation, ce qui en fait une cible utile pour disséquer les voies d’adaptation au stress et d’homéostasie ionique.

CLIC1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CLIC1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CLIC1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CLIC1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CLIC1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.