Plasmide CRISPR/Cas9 KO CLC-6 (h): sc-405938

Présentation

CLCN6 code l’échangeur intracellulaire chlorure/proton CLC-6, un membre de la famille CLC qui se localise principalement aux membranes des endosomes et des lysosomes, où il contribue à l’homéostasie ionique vésiculaire. En couplant le transport du chlorure aux gradients de protons, CLC-6 participe à la régulation de la maturation des endosomes, de l’acidification lysosomale et des processus de trafic membranaire qui influencent le tri et le renouvellement des protéines. La perturbation de ces voies peut modifier la physiologie des cellules neuronales et épithéliales, et des variations génétiques de CLCN6 ont été associées, dans des études chez l’humain, à des phénotypes neurodéveloppementaux ainsi qu’à des dysfonctionnements plus larges liés aux lysosomes. En conséquence, CLCN6 est couramment étudié dans le contexte de la biologie endolysosomale, du recyclage des cargaisons et des réponses au stress cellulaire liées à des altérations du pH des organites et de l’équilibre ionique.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CLC-6 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CLCN6 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CLCN6, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CLCN6 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CLC-6.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CLCN6 pour l'étude de la signalisation de CLC-6, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CLCN6 essentiels à la fonction de CLC-6
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CLCN6 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le CLC-6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le CLC-6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CLCN6. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le CLC-6 plasmide HDR (h) et le CLC-6 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CLCN6 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CLCN6 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.