Plasmide Double Nickase (h) CLC-5: sc-404859-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) CLC-5 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide CLC-5 Double Nickase (h) et le plasmide CLC-5 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant CLCN5. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) CLC-5 | sc-404859-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) CLC-5 | sc-404859-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le gène humain **CLCN5** code **CLC-5**, un échangeur endosomal Cl⁻/H⁺ dépendant du voltage, qui contribue à l’acidification des vésicules et à la conductance du chlorure nécessaires à l’endocytose médiée par récepteur et au trafic des protéines membranaires. CLC-5 se localise principalement aux endosomes précoces des cellules épithéliales polarisées, où il se couple fonctionnellement à l’activité de la V-ATPase pour réguler le pH luminal, le tri des cargos et leur recyclage. L’altération de **CLCN5** perturbe les voies de réabsorption du tubule proximal ainsi que l’homéostasie endolysosomale, et est associée à des dysfonctions tubulaires rénales héréditaires telles que la maladie de Dent. Ainsi, CLC-5 est fréquemment étudié en biologie du transport épithélial, en régulation des voies endocytaires et dans les mécanismes reliant la gestion ionique endosomale à la capture et à la dégradation des protéines.
CLC-5 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CLCN5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CLCN5. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CLCN5. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CLCN5.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.