CLC-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-405071

Übersicht

CLCN1 kodiert den spannungsabhängigen Chloridkanal CLC-1 der Skelettmuskulatur, der durch seine hohe Chloridleitfähigkeit in Ruhe maßgeblich die Repolarisation der Membran und die elektrische Stabilität bestimmt. Indem CLC-1 repetitives Aktionspotenzial-Feuern begrenzt und die Erregbarkeit formt, unterstützt er die normale Erregungs‑Kontraktions‑Kopplung und die Homöostase der Muskelfasern. Die Aktivität von CLCN1 wird durch Spannung, intrazelluläres Chlorid und Signalinputs reguliert, die das Gating des Kanals verändern, und ist damit mit der Physiologie des Ionentransports und dem metabolischen Zustand verknüpft. Pathogene Varianten oder eine Fehlregulation von CLCN1 sind stark mit Myotonie und verwandten neuromuskulären Phänotypen assoziiert, die durch eine beeinträchtigte Muskelrelaxation gekennzeichnet sind.

Das CLC-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des CLCN1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des CLCN1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von CLCN1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die CLC-1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von CLCN1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der CLC-1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf CLCN1-Exone abzielen, die für die CLC-1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere CLCN1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom CLC-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom CLC-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des CLCN1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das CLC-1 HDR-Plasmid (h) und CLC-1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von CLCN1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten CLCN1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.