claudin-6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-403405

Übersicht

CLDN6 kodiert Claudin-6, ein Tight-Junction-Protein mit vier Transmembrandomänen, das über die Zusammenlagerung claudinbasierter Stränge zur Ausbildung der epithelialen Barriere und zur Kontrolle der parazellulären Permeabilität beiträgt. Durch die Regulation von Zell-Zell-Adhäsion, Polarität und Signalübertragung an Zellkontakten kann Claudin-6 Prozesse beeinflussen, die mit epithelialer Differenzierung, Migration und Gewebeorganisation verknüpft sind. Eine veränderte CLDN6-Expression wurde in mehreren Tumorkontexten beschrieben, wo sie häufig im Zusammenhang mit Umbau von Zellkontakten (Junction-Remodeling), Veränderungen des epithelialen Zustands und invasionsassoziierten Signalwegen untersucht wird. Da CLDN6 entwicklungsabhängig reguliert ist und in adulten Geweben häufig nur begrenzt exprimiert wird, dient es zudem als Marker zur Untersuchung von Linien-/Differenzierungsprogrammen und Junction-Phänotypen in humanen Zellmodellen.

Das claudin-6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des CLDN6-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des CLDN6-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von CLDN6 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die claudin-6-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von CLDN6-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der claudin-6-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf CLDN6-Exone abzielen, die für die claudin-6-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere CLDN6-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom claudin-6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom claudin-6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des CLDN6-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das claudin-6 HDR-Plasmid (h) und claudin-6 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von CLDN6-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten CLDN6-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.