claudin-6 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403405-ACT

CLDN6 codifica a claudina-6, uma proteína tetraspan de junção oclusiva (tight junction) que contribui para a formação da barreira epitelial, a polaridade ápico–basal e a permeabilidade paracelular seletiva. Ao participar de complexos de tight junction com outras claudinas e proteínas de ancoragem (scaffolding), como TJP1/ZO-1, a claudina-6 ajuda a coordenar a adesão célula–célula e a sinalização das junções, em interface com programas de diferenciação e a morfogênese epitelial. Alterações na expressão de CLDN6 foram relatadas em múltiplos contextos de câncer e em modelos de desenvolvimento, nos quais a integridade desregulada das tight junctions pode influenciar a invasão, fenótipos associados à metástase e a plasticidade epitelial. Como resultado, o CLDN6 é frequentemente estudado como marcador e regulador funcional do remodelamento das junções e de transições de estado de linhagem em sistemas epiteliais humanos.

claudin-6 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CLDN6 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

claudin-6 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CLDN6 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CLDN6, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de claudin-6. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CLDN6 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de claudin-6 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via claudin-6 em células tumorais com expressão de CLDN6 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.