claudin-3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401756-ACT

CLDN3 codifica a claudina-3, uma proteína de junção oclusiva (tight junction) com quatro domínios transmembrana que contribui para a integridade da barreira epitelial e para a polaridade ápico-basolateral ao regular a permeabilidade paracelular e a arquitetura das fitas de junção. A claudina-3 coopera com outras claudinas e com proteínas de andaime das junções para coordenar a adesão célula–célula e vias de sinalização ligadas à homeostase epitelial, incluindo a comunicação cruzada com programas de remodelação associados à EMT. A expressão alterada de CLDN3 e a desorganização das tight junctions estão frequentemente associadas à biologia de tumores epiteliais, nos quais mudanças na função de barreira e na polaridade podem influenciar invasão, metástase e interações com o microambiente. Como componente juncional associado à membrana, a claudina-3 também é relevante para estudos de compartimentalização tecidual, transporte de fármacos através de epitélios e estados de diferenciação específicos de linhagem.

claudin-3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CLDN3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

claudin-3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CLDN3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CLDN3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de claudin-3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CLDN3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de claudin-3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via claudin-3 em células tumorais com expressão de CLDN3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.