Plásmido Doble Nickase (h) Clathrin Light Chain B/CLTB: sc-404228-NIC

CLTB codifica la cadena ligera B de clatrina, un componente central de las vesículas recubiertas de clatrina que regula el ensamblaje y la curvatura de las redes de clatrina durante la endocitosis y el tráfico pos-Golgi. Al modular la dinámica de las fosas recubiertas y las interacciones con adaptadores, CLTB contribuye a la internalización de receptores, al ciclo de las vesículas sinápticas y a la clasificación de proteínas de membrana a través de las vías endosomales. El transporte mediado por clatrina influye en la transducción de señales y la captación de nutrientes, vinculando el tráfico vesicular dependiente de CLTB con la homeostasis celular y las respuestas al estrés. Las alteraciones del tráfico endocítico y de la función de las vesículas recubiertas se han implicado en la biología del cáncer, la neurobiología y las interacciones huésped–patógeno, lo que sitúa a CLTB como un nodo útil para estudios mecanísticos del transporte de membrana.

Clathrin Light Chain B/CLTB El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CLTB en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CLTB. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CLTB. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CLTB alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.