Clathrin Light Chain B/CLTB CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-404228

概要

CLTBはクラスリン軽鎖Bをコードし、クラスリン媒介性エンドサイトーシスにおいて、被覆（コート）の組み立て、格子構造の動態、ならびにアダプターとの相互作用を調節するクラスリン・トリスケリオンの制御サブユニットである。形質膜およびトランスゴルジネットワークでの小胞形成における役割を通じて、CLTBは受容体の取り込み、シナプス小胞サイクル、下流シグナル伝達と栄養取り込みに影響する膜タンパク質のソーティングを支える。CLTB依存的な輸送はエンドソームのリサイクリングやリソソームへのルーティングとも接続しており、受容体の滞在時間や経路の感受性を規定する。クラスリン被覆機能やエンドサイトーシスのフラックスの破綻は、がん研究や神経変性モデルで検討されるシグナル伝達およびプロテオスタシスの表現型の変化としばしば関連付けられる。

Clathrin Light Chain B/CLTB CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるCLTB遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、CLTB内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、CLTBのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Clathrin Light Chain B/CLTBタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Clathrin Light Chain B/CLTBシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、CLTB欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Clathrin Light Chain B/CLTBの機能に不可欠なCLTBエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、CLTBゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Clathrin Light Chain B/CLTB CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびClathrin Light Chain B/CLTB CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、CLTB遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Clathrin Light Chain B/CLTB HDRプラスミド（h）および Clathrin Light Chain B/CLTB HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCLTBホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCLTB標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。