Plasmide CRISPR/Cas9 KO Clathrin Light Chain B/CLTB (h): sc-404228

Présentation

CLTB code la chaîne légère B de la clathrine, une sous-unité régulatrice du triskèle de clathrine qui module l’assemblage du manteau, la dynamique du réseau et les interactions avec les adaptateurs lors de l’endocytose médiée par la clathrine. Par son rôle dans la formation de vésicules à la membrane plasmique et au niveau du réseau trans-Golgi, CLTB soutient l’internalisation des récepteurs, le cycle des vésicules synaptiques et le tri des protéines membranaires, qui influencent la signalisation en aval et l’absorption des nutriments. Le trafic dépendant de CLTB s’articule avec le recyclage endosomal et l’adressage vers les lysosomes, façonnant le temps de résidence des récepteurs et la sensibilité des voies de signalisation. Un dysfonctionnement du manteau de clathrine et du flux endocytique est fréquemment associé à des altérations de la transduction du signal et de la protéostasie, étudiées en biologie du cancer et dans des modèles de neurodégénérescence.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Clathrin Light Chain B/CLTB (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CLTB dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CLTB, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CLTB à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Clathrin Light Chain B/CLTB.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CLTB pour l'étude de la signalisation de Clathrin Light Chain B/CLTB, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CLTB essentiels à la fonction de Clathrin Light Chain B/CLTB
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CLTB pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Clathrin Light Chain B/CLTB plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Clathrin Light Chain B/CLTB plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CLTB. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Clathrin Light Chain B/CLTB plasmide HDR (h) et le Clathrin Light Chain B/CLTB (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CLTB pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CLTB définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.