Plásmido CRISPR de Activación (h) Clathrin Light Chain B/CLTB: sc-404228-ACT

CLTB codifica la cadena ligera B de clatrina, un componente central de las vesículas recubiertas de clatrina que regula la endocitosis mediada por receptores y el tráfico intracelular entre la membrana plasmática, los endosomas y la red trans-Golgi. Al modular la dinámica de la malla de clatrina junto con la cadena pesada de clatrina y complejos adaptadores como AP2, CLTB contribuye a la selección de carga, la gemación de vesículas y el reciclaje de vesículas sinápticas en tipos celulares especializados. Este eje de tráfico influye en la duración de la señalización y en el recambio de receptores, vinculando los procesos asociados a CLTB con la homeostasis celular, la proliferación y las respuestas al estrés. El tráfico endocítico desregulado y el transporte dependiente de clatrina se estudian con frecuencia en el contexto de la neurobiología, las vías de entrada viral y las alteraciones de la señalización de receptores relacionadas con el cáncer.

Clathrin Light Chain B/CLTB El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CLTB sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Clathrin Light Chain B/CLTB El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CLTB en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CLTB, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Clathrin Light Chain B/CLTB. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CLTB y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Clathrin Light Chain B/CLTB en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Clathrin Light Chain B/CLTB en células tumorales con expresión de CLTB silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.