Plasmide Double Nickase (h) Clathrin Heavy Chain/CLTC: sc-400863-NIC

CLTC code la chaîne lourde de la clathrine, un composant structural central des puits et vésicules recouverts de clathrine, qui assure l’internalisation des récepteurs et le trafic membranaire entre la membrane plasmique, les endosomes et le réseau trans-Golgi. En s’assemblant en réseaux polyédriques avec des protéines adaptatrices, CLTC coordonne la sélection des cargos et le bourgeonnement des vésicules, soutenant l’endocytose, le recyclage des vésicules synaptiques et le renouvellement régulé des récepteurs de signalisation. Ces processus recoupent des voies qui contrôlent la signalisation des facteurs de croissance, l’absorption des nutriments et l’homéostasie des organites. Un transport médié par la clathrine dérégulé a été associé à une altération de la signalisation des récepteurs et à des réarrangements génomiques impliquant CLTC dans certaines tumeurs malignes, faisant de CLTC un nœud utile pour étudier, dans des cellules humaines, des phénotypes dépendants du trafic intracellulaire.

Clathrin Heavy Chain/CLTC Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CLTC dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CLTC. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CLTC. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CLTC.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.