Plasmide CRISPR d'Activation (h) CKR-4: sc-404778-ACT

Le CCR4 (CKR-4) humain est un récepteur de chimiokines de la famille des GPCR qui se lie à des ligands tels que CCL17 et CCL22 afin d’orienter la chimiotaxie, le positionnement cellulaire et les programmes d’activation des cellules immunitaires. La signalisation via CCR4 mobilise des protéines G hétérotrimériques et des voies en aval, notamment PI3K–AKT, MAPK et les flux calciques, modulant ainsi le trafic cellulaire et les réponses cytokiniques dans le microenvironnement tissulaire. Il est fréquemment étudié dans le contexte de la localisation de sous-populations de lymphocytes T et des interactions tumeur–immunité, où une expression modifiée du récepteur peut influencer les profils d’infiltration et la régulation immunitaire. Une expression dérégulée de CCR4 a été associée à des états inflammatoires et à des cancers, ce qui en fait un nœud pertinent pour des études mécanistiques de la migration des cellules immunitaires et des signaux du microenvironnement.

CKR-4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CCR4 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CKR-4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CCR4 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CCR4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CKR-4. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CCR4 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CKR-4 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CKR-4 dans les cellules tumorales présentant une expression de CCR4 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.