CKR-3 Double Nickase Plasmid (h): sc-404160-NIC

CCR3 (CKR-3) ist ein G‑Protein‑gekoppelter Chemokinrezeptor, der Liganden aus der Eotaxin-Familie wie CCL11, CCL24 und CCL26 bindet, um Chemotaxis, Adhäsion und Aktivierung von Eosinophilen, Basophilen und Subpopulationen Th2‑polarisierter Immunzellen zu steuern. Nach Ligandenbindung koppelt CCR3 an Gi‑Proteine und reguliert dadurch den intrazellulären Kalziumfluss, PI3K/AKT‑ und MAPK‑Signalwege, die Umgestaltung des Zytoskeletts sowie den integrinabhängigen Transport über das Endothel. Die CCR3‑abhängige Rekrutierung von Leukozyten prägt entzündliche Mikroumgebungen an Schleimhaut- und Atemwegsoberflächen und wird umfassend im Zusammenhang mit allergischer Entzündung, Asthma und eosinophilen Erkrankungen untersucht. Veränderte CCR3‑Aktivität und Expressionsmuster werden zudem bei chronischen Entzündungszuständen und in der tumorassoziierten Immunität betrachtet, wo Chemokingradienten die Infiltration von Immunzellen beeinflussen.

CKR-3 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CCR3-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CCR3 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CCR3-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CCR3-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.