Plasmide CRISPR d'Activation (h) CKR-3: sc-404160-ACT

CCR3 (CKR-3) code un récepteur des chimiokines de la superfamille des RCPG (GPCR) qui se lie préférentiellement aux éotaxines (CCL11, CCL24, CCL26) ainsi qu’à d’autres chimiokines CC afin d’orienter la chimiotaxie des leucocytes. La signalisation de CCR3 mobilise des voies dépendantes de Gαi qui régulent les flux de calcium, les cascades PI3K/AKT et MAPK, l’activation des intégrines et le remodelage du cytosquelette, coordonnant ainsi la migration et le recrutement tissulaire. En immunologie humaine, CCR3 est fortement associé au trafic des éosinophiles et des basophiles et contribue aux circuits inflammatoires au niveau des barrières muqueuses. Une activité dérégulée de CCR3 est fréquemment étudiée dans l’inflammation allergique, l’asthme et les atteintes tissulaires médiées par les éosinophiles, ainsi que dans des modèles de migration cellulaire dépendant des récepteurs.

CKR-3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CCR3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CKR-3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CCR3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CCR3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CKR-3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CCR3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CKR-3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CKR-3 dans les cellules tumorales présentant une expression de CCR3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.