CKR-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-419705

Übersicht

Ccr2 kodiert den Chemokinrezeptor CKR-2 (CCR2), einen sieben-Transmembran-GPCR, der CCL2/MCP-1 und verwandte Liganden bindet und dadurch die Chemotaxis von Monozyten und anderen myeloischen Subsets steuert. Nach Ligandenbindung signalisiert CKR-2 über Gαi-abhängige Signalwege und reguliert PI3K/AKT- und MAPK-Kaskaden, Kalziumflüsse, Integrinaktivierung sowie zytoskelettale Umbauprozesse; so prägt er die Leukozytentrajektorie und die inflammatorische Polarisierung. In der Maus ist die Ccr2-Aktivität zentral für die Rekrutierung inflammatorischer Monozyten an Orte von Gewebeschädigung und Infektion und beeinflusst die Akkumulation von Makrophagen in unterschiedlichen entzündlichen Mikroumgebungen. Eine fehlregulierte Signalübertragung der CCR2-Achse wird häufig im Kontext chronischer Entzündung, Neuroinflammation und der tumorassoziierten myeloischen Biologie untersucht, da sie die Infiltration von Immunzellen und Zytokin-Netzwerke antreiben kann.

Das CKR-2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Ccr2-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Ccr2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Ccr2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die CKR-2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Ccr2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der CKR-2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Ccr2-Exone abzielen, die für die CKR-2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Ccr2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom CKR-2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom CKR-2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Ccr2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das CKR-2 HDR-Plasmid (m) und CKR-2 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Ccr2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Ccr2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.