Plasmide CRISPR/Cas9 KO CKR-2 (m): sc-419705

Présentation

Ccr2 code pour le récepteur de chimiokines CKR‑2 (CCR2), un RCPG à sept domaines transmembranaires qui se lie à CCL2/MCP‑1 et à des ligands apparentés afin d’orienter la chimiotaxie des monocytes et d’autres sous-populations myéloïdes. Après liaison du ligand, CKR‑2 transmet le signal via des voies dépendantes de Gαi pour réguler les cascades PI3K/AKT et MAPK, le flux calcique, l’activation des intégrines et le remodelage du cytosquelette, modulant ainsi le trafic leucocytaire et la polarisation inflammatoire. Chez la souris, l’activité de Ccr2 est essentielle au recrutement des monocytes inflammatoires vers les sites de lésion tissulaire et d’infection et influence l’accumulation des macrophages au sein de divers microenvironnements inflammatoires. Une signalisation dérégulée de l’axe CCR2 est fréquemment étudiée dans l’inflammation chronique, la neuroinflammation et la biologie myéloïde associée aux tumeurs, en tant que moteur de l’infiltration des cellules immunitaires et des réseaux de cytokines.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CKR-2 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Ccr2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Ccr2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Ccr2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CKR-2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Ccr2 pour l'étude de la signalisation de CKR-2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Ccr2 essentiels à la fonction de CKR-2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Ccr2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le CKR-2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le CKR-2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Ccr2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le CKR-2 plasmide HDR (m) et le CKR-2 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Ccr2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Ccr2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.