Plasmide CRISPR/Cas9 KO CKR-10 (h): sc-407896

Présentation

CCR10 code pour le récepteur des chimiokines CKR-10, un RCPG à sept domaines transmembranaires qui se lie aux ligands CCL27 et CCL28 afin d’orienter la chimiotaxie des leucocytes et leur homing spécifique aux tissus. La signalisation de CKR-10 mobilise des protéines G hétérotrimériques pour réguler les flux de calcium, les voies dépendantes de MAPK et de PI3K, l’activation des intégrines et le remodelage du cytosquelette, qui, ensemble, façonnent la migration cellulaire et le positionnement au niveau des barrières épithéliales. Ce récepteur est impliqué dans la surveillance immunitaire et les programmes de trafic inflammatoire dans la peau et les tissus muqueux, où une activité altérée de CCR10 peut modifier la composition locale des cellules immunitaires. Des réseaux de chimiokines associés à CCR10 et dérégulés ont été étudiés dans le contexte de l’inflammation chronique et de la biologie du microenvironnement tumoral, ce qui étaye sa pertinence en tant que nœud mécanistique pour des recherches axées sur la migration.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CKR-10 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CCR10 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CCR10, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CCR10 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CKR-10.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CCR10 pour l'étude de la signalisation de CKR-10, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CCR10 essentiels à la fonction de CKR-10
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CCR10 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le CKR-10 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le CKR-10 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CCR10. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le CKR-10 plasmide HDR (h) et le CKR-10 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CCR10 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CCR10 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.