Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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citrate synthase Double Nickase Plasmid (h): sc-402227-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das citrate synthase Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- citrate synthase Double-Nickase-Plasmid (h) und citrate synthase Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CS abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: citrate synthase: sc-390693
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
citrate synthase Double Nickase Plasmid (h) | sc-402227-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
citrate synthase Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402227-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das humane **CS**-Gen kodiert die Citrat-Synthase, ein Enzym der mitochondrialen Matrix, das die Kondensation von Oxalacetat und Acetyl‑CoA zu Citrat katalysiert und damit den Stofffluss durch den Tricarbonsäurezyklus (TCA-Zyklus) einleitet. Durch die Kontrolle des Eintritts in den oxidativen Metabolismus unterstützt die Citrat-Synthase die Bildung von NADH/FADH2 für die Elektronentransportkette und beeinflusst anaplerotische/kataplerotische Prozesse, die den Kohlenhydrat-, Lipid- und Aminosäurestoffwechsel miteinander verknüpfen. Die CS-Aktivität steht im Schnittpunkt von mitochondrialer Bioenergetik, Redox-Homöostase und citratabhängigen Biosyntheseprozessen wie der Fettsäure- und Sterolsynthese. Veränderte mitochondriale Stoffwechselprozesse unter Beteiligung der TCA-Zyklus-Funktion werden häufig in Zusammenhängen wie metabolischer Dysregulation, Neurodegeneration und proliferativen Phänotypen untersucht, bei denen mitochondriale Kapazität und Substratnutzung umgebaut werden.
citrate synthase Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CS-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CS abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CS-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CS-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.