Plasmide CRISPR/Cas9 KO CIP4 (h): sc-406095
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- CIP4 Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique CIP4, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: CIP4 Antibody (F-10): sc-166810
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO CIP4 (h) | sc-406095 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
TRIP10 code la protéine 4 interagissant avec Cdc42 (CIP4), un adaptateur à domaines F-BAR/SH3 qui relie la détection de la courbure membranaire au remodelage du cytosquelette d’actine. CIP4 coopère avec Cdc42, la dynamine et N-WASP pour coordonner l’endocytose médiée par la clathrine, le trafic vésiculaire et l’assemblage de l’actine corticale, influençant ainsi l’internalisation des récepteurs et l’atténuation des signaux. Par ces fonctions, CIP4 contribue à des processus tels que la polarité cellulaire, la migration et la dynamique de protrusions de type invadopodes, l’inscrivant dans des voies qui régulent l’organisation du cytosquelette et le remodelage membranaire. Une activité dérégulée de TRIP10/CIP4 a été étudiée dans le contexte d’une motilité cellulaire et de programmes de signalisation aberrants, pertinents pour la biologie des cancers et d’autres troubles impliquant des réseaux d’endocytose et d’actine altérés.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CIP4 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène TRIP10 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du TRIP10, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert TRIP10 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CIP4.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en TRIP10 pour l'étude de la signalisation de CIP4, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de TRIP10 essentiels à la fonction de CIP4
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de TRIP10 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le CIP4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le CIP4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus TRIP10. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le CIP4 plasmide HDR (h) et le CIP4 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie TRIP10 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles TRIP10 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.