Plasmide Double Nickase (h) Cingulin: sc-404409-NIC

CGN code la cinguline, une protéine d’échafaudage cytoplasmique concentrée au niveau des jonctions serrées, où elle relie les composants jonctionnels transmembranaires au cytosquelette cortical d’actine. La cinguline coordonne la formation et le maintien de la barrière épithéliale en modulant l’assemblage des jonctions, la polarité cellulaire et l’organisation du cytosquelette, et elle s’interface avec des voies de signalisation qui régulent la tension jonctionnelle et l’activité des GTPases de la famille Rho. Par ces fonctions, CGN influence la perméabilité paracellulaire et l’homéostasie tissulaire dans les épithéliums et endothéliums polarisés. Des altérations de l’architecture des jonctions serrées et des réseaux régulateurs associés à la cinguline sont fréquemment étudiées dans des contextes de dysfonction de barrière, d’inflammation et de remodelage épithélial, pertinents pour des phénotypes de maladies complexes.

Cingulin Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CGN dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CGN. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CGN. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CGN.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.