Particules Lentivirales d'Activation (m2) CIITA: sc-419390-LAC-2

Le gène murin Ciita code le transactivateur du complexe majeur d’histocompatibilité de classe II (CIITA), un régulateur maître ne se liant pas à l’ADN qui coordonne la transcription des gènes du CMH de classe II et de facteurs accessoires de présentation de l’antigène via des interactions avec l’enhanceosome RFX, NF-Y et CREB/ATF. L’activité de CIITA régit la présentation d’antigènes inductible dans les cellules présentatrices d’antigène professionnelles et peut être stimulée par des signaux cytokiniques tels que l’IFN-γ, reliant ainsi des signaux de l’immunité innée aux réponses des lymphocytes T CD4+ de l’immunité adaptative. Un dérèglement de la fonction de Ciita/CIITA est associé à une expression modifiée du CMH de classe II et à des phénotypes immunitaires pertinents pour l’infection, l’auto-immunité et la surveillance immunitaire des tumeurs dans des modèles murins. L’édition du gène Ciita et les études de perturbation centrées sur CIITA soutiennent la recherche mécanistique sur les voies de présentation de l’antigène, le contrôle épigénétique de la transcription des gènes immunitaires et les cribles de génomique fonctionnelle en immunologie et en inflammation.

Les particules d'activation lentivirales CIITA (m2) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Ciita dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales CIITA (m2) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Ciita, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de CIITA. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Ciita ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.