Plasmide CRISPR/Cas9 KO CIDE-B (h): sc-403808

Présentation

CIDEB code CIDE-B, un membre de la famille des protéines contenant un domaine CIDE, impliquée dans la régulation de la dynamique des gouttelettes lipidiques, de l’homéostasie énergétique et de processus associés à la mort cellulaire. Dans les tissus humains présentant une activité importante de gestion des lipides, CIDE-B contribue à des voies reliant le stockage et le renouvellement des lipides neutres à la signalisation métabolique, notamment le métabolisme lipidique hépatique et des programmes associés aux adipocytes. Une expression ou une fonction altérée de CIDEB a été associée à une accumulation lipidique dérégulée et à des phénotypes métaboliques pertinents pour l’obésité, la résistance à l’insuline et des mécanismes de maladies liées à la stéatose hépatique. Ainsi, CIDEB est étudié pour son rôle dans la coordination de la biologie des gouttelettes lipidiques avec les réponses au stress et la fonction mitochondriale dans les cellules métaboliquement actives.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CIDE-B (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CIDEB dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CIDEB, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CIDEB à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CIDE-B.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CIDEB pour l'étude de la signalisation de CIDE-B, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CIDEB essentiels à la fonction de CIDE-B
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CIDEB pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le CIDE-B plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le CIDE-B plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CIDEB. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le CIDE-B plasmide HDR (h) et le CIDE-B (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CIDEB pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CIDEB définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.