Plasmide CRISPR/Cas9 KO Chymotrypsin (h): sc-407305

Présentation

CTRC code la chymotrypsine C, une protéase pancréatique à sérine sécrétée qui module l’activité des protéases digestives en clivant les trypsinogènes et en dégradant la trypsine active, contribuant ainsi à l’homéostasie des protéases dans le pancréas exocrine. Par une protéolyse régulée au sein du réseau d’activation des enzymes pancréatiques, CTRC participe à façonner la digestion protéique en aval et limite une activité trypsique intrapancréatique aberrante. Une dérégulation de la fonction de CTRC et un déséquilibre des protéases sont impliqués dans des phénotypes inflammatoires pancréatiques, notamment la susceptibilité à la pancréatite chronique et aux dysfonctionnements exocrines associés. CTRC est donc étudiée dans les voies qui contrôlent l’activation des zymogènes, les réponses au stress du réticulum endoplasmique dans les cellules acinaires, ainsi que les lésions tissulaires médiées par les protéases.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Chymotrypsin (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CTRC dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CTRC, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CTRC à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Chymotrypsin.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CTRC pour l'étude de la signalisation de Chymotrypsin, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CTRC essentiels à la fonction de Chymotrypsin
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CTRC pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Chymotrypsin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Chymotrypsin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CTRC. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Chymotrypsin plasmide HDR (h) et le Chymotrypsin (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CTRC pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CTRC définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.