Chx10 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401103

Übersicht

VSX2 (Chx10) ist ein Homeobox-Transkriptionsfaktor, der eine zentrale Rolle bei der Spezifikation des Augenfeldes und der Proliferation retinaler Vorläuferzellen spielt und damit Neurogenese sowie Zellschicksalsentscheidungen während der Retinogenese bei Wirbeltieren koordiniert. Er reguliert Transkriptionsprogramme, die die Entwicklung retinaler Bipolarneurone und die Aufrechterhaltung der Identität der neuralen Retina steuern, und ist in entwicklungsbiologische Signalnetzwerke wie WNT/β-Catenin, SHH und die Notch-assoziierte Genregulation eingebunden. Eine veränderte VSX2-Funktion wurde mit angeborenen okulären Fehlbildungen einschließlich Mikrophthalmie und Anophthalmie in Verbindung gebracht, und eine fehlregulierte Expression ist relevant für Studien zu Mechanismen retinaler Dystrophien sowie zur Entwicklung von aus Stammzellen abgeleiteten retinalen Organoiden. Als DNA-bindender Regulator wird Chx10 häufig hinsichtlich seiner Effekte auf Differenzierungsverläufe, Lineage-Festlegung und Genregulationsnetzwerke in okulären und neuronalen Modellen untersucht.

Das Chx10 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des VSX2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des VSX2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von VSX2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Chx10-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von VSX2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Chx10-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf VSX2-Exone abzielen, die für die Chx10-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere VSX2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Chx10 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Chx10 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des VSX2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Chx10 HDR-Plasmid (h) und Chx10 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von VSX2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten VSX2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.