Chx10 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401103

Descripción general

VSX2 (Chx10) es un factor de transcripción con homeodominio que desempeña un papel central en la especificación del campo ocular y en la proliferación de las células progenitoras de la retina, ayudando a coordinar la neurogénesis y las decisiones de destino celular durante la retinogénesis de los vertebrados. Regula programas transcripcionales que controlan el desarrollo de las neuronas bipolares de la retina y el mantenimiento de la identidad de la retina neural, e interactúa con redes de señalización del desarrollo como la regulación génica asociada a WNT/β-catenina, SHH y Notch. Las alteraciones en la función de VSX2 se han vinculado a malformaciones oculares congénitas, como la microftalmia y la anoftalmia, y su expresión desregulada es relevante en estudios sobre mecanismos de distrofia retiniana y el desarrollo de organoides retinianos derivados de células madre. Como regulador que se une al ADN, Chx10 se investiga comúnmente por sus efectos sobre las trayectorias de diferenciación, el compromiso de linaje y las redes de regulación génica en modelos oculares y neuronales.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Chx10 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen VSX2 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del VSX2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de VSX2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Chx10.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en VSX2 para la investigación de la señalización de Chx10, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de VSX2 críticos para la función de Chx10
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de VSX2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Chx10 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Chx10 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus VSX2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Chx10 (h) y el plásmido HDR Chx10 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología VSX2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana VSX2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.