Plasmide CRISPR d'Activation (h) CHST1: sc-403978-ACT

CHST1 code une sulfotransférase des glucides 1, une enzyme résidente de l’appareil de Golgi qui transfère un groupement sulfate sur des résidus de galactose présents sur les glycoprotéines et les glycolipides, contribuant à la biosynthèse de glycosaminoglycanes sulfatés et de glycoconjugués apparentés. En façonnant les profils de sulfatation à la surface cellulaire et dans la matrice extracellulaire, CHST1 influence les interactions ligand–récepteur, l’adhésion des leucocytes et la signalisation des facteurs de croissance/cytokines au sein des voies du métabolisme de la glycosylation et des protéoglycanes. Une sulfatation altérée peut remodeler le glycocalyx et moduler la reconnaissance immunitaire ainsi que la migration cellulaire, reliant l’activité de CHST1 à des mécanismes pertinents pour l’inflammation et le comportement des cellules tumorales. CHST1 présente donc un intérêt pour l’étude de la régulation, dépendante des glycannes, de la signalisation, de l’adhésion et des interactions avec le microenvironnement.

CHST1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CHST1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CHST1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CHST1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CHST1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CHST1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CHST1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CHST1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CHST1 dans les cellules tumorales présentant une expression de CHST1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.