Plásmido Doble Nickase (h) ChREBP: sc-401803-NIC

MLXIPL codifica la proteína de unión al elemento de respuesta a carbohidratos (ChREBP), un factor de transcripción sensible a la glucosa que vincula la disponibilidad de carbohidratos con la expresión de genes lipogénicos y glucolíticos. Tras señales metabólicas, ChREBP coopera con cofactores como MLX para regular promotores que contienen elementos de respuesta a carbohidratos, integrando la detección de nutrientes con el control transcripcional del metabolismo hepático y adiposo. Este eje regulador contribuye a vías que gobiernan la lipogénesis de novo, la síntesis de triglicéridos y la homeostasis de la glucosa, conectando la actividad de ChREBP con la remodelación metabólica en condiciones de exceso de nutrientes. La señalización desregulada de MLXIPL/ChREBP se ha asociado con resistencia a la insulina, fenotipos de hígado graso y mecanismos más amplios de enfermedad cardiometabólica, lo que lo convierte en un nodo relevante para el estudio de redes génicas metabólicas.

ChREBP El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus MLXIPL en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de MLXIPL. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de MLXIPL. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con MLXIPL alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.