Plasmide CRISPR d'Activation (h) ChREBP: sc-401803-ACT

Le gène humain **MLXIPL** code la **protéine de liaison aux éléments de réponse aux glucides** (ChREBP), un facteur de transcription sensible au glucose qui forme un hétérodimère avec MLX et se fixe aux éléments de réponse aux glucides afin de réguler des gènes impliqués dans la glycolyse, la lipogenèse de novo et le métabolisme des triglycérides. L’activité de ChREBP est modulée par des signaux nutritionnels et hormonaux et intègre la signalisation issue du métabolisme du glucose avec des programmes transcriptionnels dans le foie, le tissu adipeux et les îlots pancréatiques. Une dérégulation de la signalisation MLXIPL/ChREBP est associée au remodelage métabolique observé dans la résistance à l’insuline, la stéatose hépatique non alcoolique et, plus largement, à des phénotypes liés à l’homéostasie lipidique. En tant que nœud central de la transcription répondant aux nutriments, ChREBP est largement étudié pour ses effets sur l’équilibre énergétique cellulaire, l’état rédox et les flux métaboliques.

ChREBP Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MLXIPL sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ChREBP Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MLXIPL dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MLXIPL, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ChREBP. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MLXIPL natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ChREBP au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ChREBP dans les cellules tumorales présentant une expression de MLXIPL silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.