Plasmide Double Nickase (h) chordin: sc-404997-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) chordin correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide chordin Double Nickase (h) et le plasmide chordin Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant CHRD. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) chordin | sc-404997-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) chordin | sc-404997-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CHRD humain code la chordin, une glycoprotéine sécrétée de la matrice extracellulaire qui antagonise la signalisation BMP en se liant à BMP2/4/7 et en limitant l’engagement des récepteurs. En façonnant la formation des gradients de BMP et en modulant les niveaux de phosphorylation de SMAD1/5/9, la chordin contribue au contrôle de la mise en place de l’axe dorso-ventral, de l’induction du mésoderme et de l’organogenèse, et demeure pertinente pour les voies qui régissent la différenciation ostéogénique et chondrogénique. Une activité altérée de CHRD peut perturber l’équilibre des signaux du développement et a été étudiée dans le contexte de malformations congénitales et de processus de remodelage tissulaire dérégulés. Dans les systèmes de culture, la perturbation de CHRD est couramment utilisée pour étudier les interactions (crosstalk) de la voie BMP avec les voies WNT et TGF-β et pour disséquer la régulation extracellulaire de la disponibilité des morphogènes.
chordin Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CHRD dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CHRD. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CHRD. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CHRD.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.