ChoK CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-403793

Übersicht

CHKA kodiert die Cholin-Kinase alpha (ChoK), das geschwindigkeitsbestimmende Enzym, das im Kennedy-Weg der Phosphatidylcholin-Biosynthese Cholin zu Phosphocholin phosphoryliert. Indem ChoK die Phosphocholin-Pools und die Produktion von Membranphospholipiden steuert, verknüpft es den Lipidstoffwechsel mit dem Fortschreiten des Zellzyklus, der Membranbiogenese und Signaltransduktionsnetzwerken, die von aus Phosphatidylcholin abgeleiteten Second Messengern abhängen. Eine veränderte CHKA-Aktivität wurde mit metabolischer Reprogrammierung und fehlregulierten Proliferationsprogrammen in mehreren krankheitsrelevanten zellulären Kontexten in Verbindung gebracht, was CHKA zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung lipidgetriebener Signalwege macht. Studien zu CHKA/ChoK überschneiden sich häufig mit Signalwegen, die Membrandynamik, Stressantworten und onkogene Wachstumsfaktor-Signalgebung regulieren.

Das ChoK CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des CHKA-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des CHKA-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von CHKA nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die ChoK-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von CHKA-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der ChoK-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf CHKA-Exone abzielen, die für die ChoK-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere CHKA-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom ChoK CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom ChoK CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des CHKA-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das ChoK HDR-Plasmid (h) und ChoK HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von CHKA-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten CHKA-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.