Plasmide CRISPR d'Activation (h) ChM-1: sc-403523-ACT

CNMD code la chondromoduline‑1 (ChM‑1), une protéine sécrétée associée à la matrice extracellulaire, enrichie dans le cartilage avasculaire et impliquée dans le maintien du microenvironnement anti‑angiogénique des tissus conjonctifs en développement et matures. ChM‑1 participe à la régulation du comportement des cellules endothéliales, à l’homéostasie du cartilage et au remodelage de la matrice extracellulaire, ce qui la relie à des voies qui coordonnent la vascularisation tissulaire et la différenciation chondrogénique. Des altérations de l’expression de CNMD ont été étudiées dans des contextes de dégénérescence cartilagineuse et de néovascularisation aberrante, où des changements de signalisation matricielle peuvent influencer les réponses inflammatoires et hypoxiques. En conséquence, CNMD est largement étudié en biologie musculosquelettique, en biologie vasculaire et dans la recherche sur le microenvironnement tumoral, en tant que modulateur du dialogue croisé entre stroma et compartiment vasculaire.

ChM-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CNMD sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ChM-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CNMD dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CNMD, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ChM-1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CNMD natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ChM-1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ChM-1 dans les cellules tumorales présentant une expression de CNMD silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.