Particules Lentivirales d'Activation (h) Chk1: sc-400223-LAC

Le gène humain **CHEK1** code la kinase de point de contrôle 1 (**Chk1**), une kinase sérine/thréonine qui coordonne la réponse aux dommages de l’ADN dépendante d’ATR face au stress de réplication. Chk1 régule la progression en phase S et le point de contrôle G2/M en phosphorylant des effecteurs qui limitent l’activité des CDK, stabilisent les fourches de réplication bloquées et favorisent la réparation associée à la recombinaison homologue ainsi que l’arrêt du cycle cellulaire. Cet axe de signalisation s’interface avec des voies qui gouvernent l’intégrité du génome, notamment la protection des fourches de réplication, le contrôle de l’activation des origines et l’entrée en mitose, ce qui rend l’activité de CHEK1 particulièrement pertinente pour les mécanismes d’instabilité chromosomique. La dérégulation des sorties de la voie CHEK1 est fréquemment étudiée dans le contexte de la biologie tumorale, des réponses au stress génotoxique et des déterminants de la sensibilité aux agressions endommageant l’ADN dans des systèmes modèles.

Les particules d'activation lentivirales Chk1 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de CHEK1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales Chk1 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription CHEK1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de Chk1. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif CHEK1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.