Plasmide Double Nickase (h) Chitotriosidase: sc-402112-NIC

CHIT1 code la chitotriosidase humaine, une glycosylhydrolase sécrétée produite principalement par les macrophages activés et d’autres cellules myéloïdes, qui dégrade des polysaccharides de type chitine et participe à la défense immunitaire innée. CHIT1 est liée à la biologie lysosomale et phagolysosomale, aux programmes d’activation des macrophages et aux processus de remodelage associés à la matrice extracellulaire qui accompagnent l’inflammation chronique. Des altérations de l’expression ou de l’activité de CHIT1 sont fréquemment utilisées comme indicateur moléculaire de la charge en macrophages et des états inflammatoires, et des variations génétiques de CHIT1 peuvent influencer la fonction enzymatique dans les populations humaines. En conséquence, CHIT1 est pertinente pour l’étude des maladies granulomateuses et des maladies de surcharge lysosomale, de l’inflammation et du remodelage des voies aériennes, ainsi que, plus largement, de la régulation immunométabolique de l’homéostasie tissulaire.

Chitotriosidase Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CHIT1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CHIT1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CHIT1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CHIT1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.