Plasmide CRISPR d'Activation (h) Chitotriosidase: sc-402112-ACT

CHIT1 code la chitotriosidase, une hydrolase des glycosides sécrétée et lysosomale, exprimée principalement par les macrophages activés et d’autres cellules myéloïdes. Bien que l’être humain ne synthétise pas la chitine, CHIT1 participe aux réponses immunitaires innées en reconnaissant et en dégradant des structures contenant de la chitine provenant de champignons et de parasites, et est liée à la polarisation des macrophages, au fonctionnement des lysosomes et aux programmes de signalisation inflammatoire. Des altérations de l’expression de CHIT1 et de son activité enzymatique ont été associées à des troubles caractérisés par l’activation des macrophages et le remodelage tissulaire, notamment les maladies de surcharge lysosomale et les affections inflammatoires chroniques. En tant qu’indicateur de l’activation myéloïde, CHIT1 est fréquemment étudiée dans des contextes d’interactions hôte–pathogène, d’inflammation granulomateuse et de microenvironnements fibrosants.

Chitotriosidase Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CHIT1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Chitotriosidase Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CHIT1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CHIT1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Chitotriosidase. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CHIT1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Chitotriosidase au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Chitotriosidase dans les cellules tumorales présentant une expression de CHIT1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.