Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Plasmide Double Nickase (h) CHIP/STUB1: sc-400815-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) CHIP/STUB1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide CHIP/STUB1 Double Nickase (h) et le plasmide CHIP/STUB1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant STUB1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: CHIP/STUB1 Antibody (G-2): sc-133066
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) CHIP/STUB1 | sc-400815-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) CHIP/STUB1 | sc-400815-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
STUB1 code pour CHIP, une ligase E3 ubiquitine de type U-box et co-chaperon qui couple la reconnaissance des clients par HSP70/HSP90 à l’ubiquitination et à leur dégradation par le protéasome, régulant ainsi le contrôle qualité des protéines. CHIP/STUB1 interagit aussi avec les voies d’autophagie et la signalisation de réponse au stress afin de maintenir la protéostasie dans des conditions telles que le choc thermique et le stress oxydant. En contrôlant la stabilité des protéines mal repliées ou endommagées, il influence l’homéostasie cellulaire, la fonction mitochondriale et des processus liés à l’apoptose. Une dérégulation ou des variants pathogènes de STUB1 sont associés à des phénotypes de neurodégénérescence et d’ataxie, ce qui en fait une cible largement étudiée dans des voies impliquées dans les protéinopathies.
CHIP/STUB1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus STUB1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de STUB1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de STUB1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de STUB1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.