Plasmide Double Nickase (h) ChemR23: sc-403033-NIC

CMKLR1 code ChemR23, un récepteur couplé aux protéines G de classe A (RCPG) du chimioattractant chemerine (RARRES2) ainsi que de ligands lipidiques pro-résolutifs tels que la résolvine E1. La signalisation via ChemR23 mobilise des voies dépendantes de Gi, notamment l’inhibition de l’adénylate cyclase, l’activation de MAPK/ERK, la mobilisation du Ca2+ intracellulaire et le trafic médié par la β-arrestine, modulant la chimiotaxie des leucocytes et les réponses des macrophages et des cellules dendritiques. Dans les tissus humains, CMKLR1 contribue à la détection des signaux inflammatoires et à l’homéostasie métabolique, reliant le recrutement des cellules immunitaires à la biologie du tissu adipeux et du compartiment vasculaire. Une activité CMKLR1/ChemR23 dysrégulée a été associée à des troubles inflammatoires et à des phénotypes cardiométaboliques, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques sur le dialogue immuno-métabolique.

ChemR23 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CMKLR1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CMKLR1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CMKLR1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CMKLR1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.