Plasmide CRISPR d'Activation (h) ChemR23: sc-403033-ACT

CMKLR1 code ChemR23, un récepteur couplé aux protéines G qui se lie à la chémérine (RARRES2) et au médiateur lipidique pro-résolutif résolvine E1 afin de réguler la chimiotaxie et l’adhésion des leucocytes, ainsi que l’activation de l’immunité innée. La signalisation de ChemR23 mobilise des voies dépendantes de Gi qui modulent l’AMPc, les flux de calcium intracellulaire et, en aval, les programmes MAPK/ERK et PI3K, influençant le tonus inflammatoire et le remodelage tissulaire. L’axe CMKLR1 est impliqué dans le trafic des macrophages et des cellules dendritiques, la biologie du tissu adipeux et les réponses vasculaires, reliant l’activité du récepteur à des états inflammatoires chroniques. Des altérations de l’expression de ChemR23 et de la disponibilité de ses ligands ont été associées à l’inflammation métabolique, à des affections auto-immunes et à la dynamique du microenvironnement tumoral, ce qui en fait un nœud pertinent pour l’exploration des voies dans des systèmes cellulaires humains.

ChemR23 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CMKLR1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ChemR23 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CMKLR1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CMKLR1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ChemR23. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CMKLR1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ChemR23 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ChemR23 dans les cellules tumorales présentant une expression de CMKLR1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.