Plasmide CRISPR d'Activation (h) CHD5: sc-402429-ACT

CHD5 (chromodomain helicase DNA-binding protein 5) est un remodeleur de la chromatine dépendant de l’ATP, enrichi dans les neurones, appartenant à la famille SNF2, qui coordonne le positionnement des nucléosomes et les programmes transcriptionnels nécessaires à la différenciation et à la stabilité du génome. Grâce à ses chromodomaines et à son activité hélicase/ATPase, CHD5 module l’accessibilité de la chromatine au niveau des éléments régulateurs et s’interface avec des voies épigénétiques contrôlant la progression du cycle cellulaire, les réponses aux dommages de l’ADN et l’expression génique spécifique de lignée. Une activité réduite de CHD5 a été associée à une perturbation du contrôle transcriptionnel et à une instabilité chromosomique, et une expression altérée de CHD5 est fréquemment liée à des réseaux suppresseurs de tumeurs dans le neuroblastome et d’autres cancers. En recherche biomédicale, CHD5 est largement étudiée pour ses rôles dans la dynamique de la chromatine, le développement neuronal et les mécanismes par lesquels une dérégulation épigénétique contribue à des phénotypes pertinents pour les maladies.

CHD5 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CHD5 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CHD5 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CHD5 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CHD5, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CHD5. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CHD5 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CHD5 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CHD5 dans les cellules tumorales présentant une expression de CHD5 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.