CHCHD10 Double Nickase Plasmid (h): sc-407891-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das CHCHD10 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- CHCHD10 Double-Nickase-Plasmid (h) und CHCHD10 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CHCHD10 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
CHCHD10 Double Nickase Plasmid (h) | sc-407891-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CHCHD10 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-407891-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CHCHD10 kodiert ein Protein mit einer Coiled-coil-helix–Coiled-coil-helix-Domäne, das in den Mitochondrien lokalisiert ist und die Integrität der mitochondrialen Cristae sowie die Funktion der Atmungskette unterstützt. Es ist an Signal- und Stoffwechselwegen beteiligt, die die oxidative Phosphorylierung, die mitochondriale Dynamik und zelluläre Stressantworten steuern, und beeinflusst damit die bioenergetische Homöostase und die Anfälligkeit für Apoptose. Eine Fehlregulation oder Mutation von CHCHD10 wurde mit neurodegenerativen Phänotypen in Verbindung gebracht, einschließlich Erkrankungen aus dem Spektrum der Motoneuron- und frontotemporalen Störungen, was mit seiner Rolle bei der Aufrechterhaltung der mitochondrialen Proteostase übereinstimmt. Daher wird CHCHD10 häufig in Modellen für mitochondriale Dysfunktion, proteotoxischen Stress und neuronrelevanten Energiestoffwechsel untersucht.
CHCHD10 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CHCHD10-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CHCHD10 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CHCHD10-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CHCHD10-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.