Cerebellin 1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-407032

Übersicht

CBLN1 kodiert Cerebellin 1, ein sezerniertes Glykoprotein, das im zentralen Nervensystem angereichert ist und als synaptischer Organisator wirkt, der die Bildung und Aufrechterhaltung exzitatorischer Synapsen unterstützt. Cerebellin 1 ist an transsynaptischen Adhäsionskomplexen beteiligt, die präsynaptische und postsynaptische Spezialisierungen koppeln und so die synaptische Konnektivität und Neurotransmission in Kleinhirn- und verwandten Schaltkreisen prägen. Über diese Wechselwirkungen beeinflusst es die neuronale Entwicklung, synaptische Plastizität und Prozesse der Schaltkreisverfeinerung, die für die motorische Koordination und das Lernen zentral sind. Eine veränderte CBLN1-Expression oder eine gestörte, durch Cerebellin vermittelte synaptische Organisation wurde mit neuroentwicklungsbezogenen und neuropsychiatrischen Phänotypen in Verbindung gebracht, was CBLN1 für mechanistische Untersuchungen von Synaptopathien relevant macht.

Das Cerebellin 1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des CBLN1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des CBLN1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von CBLN1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Cerebellin 1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von CBLN1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Cerebellin 1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf CBLN1-Exone abzielen, die für die Cerebellin 1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere CBLN1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Cerebellin 1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Cerebellin 1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des CBLN1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Cerebellin 1 HDR-Plasmid (h) und Cerebellin 1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von CBLN1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten CBLN1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.