Centrin-2 Double Nickase Plasmid (h): sc-400867-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Centrin-2 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Centrin-2 Double-Nickase-Plasmid (h) und Centrin-2 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CETN2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Centrin-2: sc-293192
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Centrin-2 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400867-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Centrin-2 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400867-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CETN2 kodiert Centrin-2, ein konserviertes EF-Hand-Calciumbindungsprotein, das an Zentrosomen und Basalkörperchen lokalisiert, wo es die Zentriolenduplikation, den Zusammenhalt des Zentrosoms sowie die zilienassoziierte Organisation der Mikrotubuli unterstützt. Centrin-2 ist an der zellzyklusgekoppelten Kontrolle der Mikrotubuli-Nukleation und des Spindelaufbaus beteiligt und trägt über die Aufrechterhaltung der Zentrosomen-Homöostase sowie über Interaktionen mit DNA-Reparatur-assoziierten Faktoren zur Genomstabilität bei. Störungen der Zentrosomenintegrität und der mit der Centrin-Funktion verbundenen Ziliogenese-Wege sind häufig mit chromosomaler Instabilität und proliferativen Phänotypen verknüpft, die für die Krebsbiologie relevant sind. CETN2 wird daher häufig als Marker und mechanistischer Knotenpunkt in Studien zur Zentrosomendynamik, zur Zuverlässigkeit der Zellteilung und zu ziliumbezogenen zellulären Prozessen verwendet.
Centrin-2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CETN2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CETN2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CETN2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CETN2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.