Centrin-2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400867

Descripción general

CETN2 codifica la centrina-2, una proteína conservada de unión a calcio tipo EF-hand que se localiza en los centrosomas y los cuerpos basales y contribuye a la duplicación de los centriolos, la integridad del centrosoma y la organización del huso durante la división celular. La centrina-2 también participa en el ensamblaje y la función del cilio primario, vinculando la actividad de CETN2 con el control del ciclo celular y procesos dependientes de microtúbulos como la ciliogénesis. A través de sus funciones en la homeostasis del centrosoma y en las redes de señalización ciliar, las alteraciones en la dinámica de la centrina-2 pueden influir en la estabilidad genómica y en programas de diferenciación celular que con frecuencia se ven perturbados en el cáncer y en la biología relacionada con las ciliopatías. Por ello, CETN2 se utiliza ampliamente como una herramienta molecular para investigar vías asociadas al centrosoma, la fidelidad mitótica y las salidas de señalización dependientes de cilios en células humanas.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Centrin-2 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen CETN2 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del CETN2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de CETN2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Centrin-2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en CETN2 para la investigación de la señalización de Centrin-2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de CETN2 críticos para la función de Centrin-2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de CETN2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Centrin-2 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Centrin-2 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus CETN2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Centrin-2 (h) y el plásmido HDR Centrin-2 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología CETN2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana CETN2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.